
齧齒類實驗動物常見(jiàn)的鞭毛蟲
鞭毛蟲屬(shǔ)於原蟲,即具有獨立完成生命活動的單細胞真核生物,在生(shēng)物學分類上隸屬於肉足(zú)鞭毛門,鞭毛亞門(mén),動物鞭毛綱。鞭毛蟲顧名思義,鞭毛為其特征,滋養體階段有一根或多根鞭毛,但(dàn)也(yě)有些特殊種類為阿米巴型,會存在無(wú)鞭(biān)毛形態。本篇將介紹齧齒類動物中常見的鞭毛蟲。
齧齒類實驗動物常見的腸道(dào)鞭毛蟲
01毛滴(dī)蟲
毛滴蟲隸(lì)屬於毛滴蟲目(Trichomonadida),毛滴蟲科(Trichomonadidae),該科(kē)分為兩個屬,毛滴蟲屬(Trichomonas)和三毛滴蟲屬(Tritrichomonas)。目前已(yǐ)知至少有四(sì)種毛滴蟲可以感染齧(niè)齒類動物,包括小鼠三(sān)毛滴蟲(Tritrichomonas musculis)、人五毛滴蟲(Pentatrichomonas hominis)、鼠三毛滴蟲(Trichomonas muris)和微小三毛滴蟲(Tritrichomonas minuta)。其中鼠三毛滴蟲是齧齒(chǐ)類實驗動物最常見的鞭毛蟲,它具有滋養體和假包囊兩種存在形式。其滋養(yǎng)體大小約18~24umx12~14um,呈梨(lí)形;假包囊呈球形,直徑約8um~13um。
包(bāo)囊是原蟲在其生活階段中,由蟲體本身形成的一層較厚的外膜,具有較強的抵抗作用;當這個外膜並(bìng)非由蟲體本(běn)身形成,而是來(lái)源於宿主,則(zé)稱為假包囊。在(zài)生活期或(huò)運動期,吸取外界營養而生長(zhǎng)的蟲(chóng)體,稱為滋養(yǎng)體。滋養體較脆弱,無法在轉移宿主過程中存活,通常不(bú)具有傳染性。鼠(shǔ)三毛滴蟲的假包囊是它的感染階段,假包(bāo)囊對幹燥的環(huán)境抵抗不佳,一般存活不超過48h。
鼠三毛滴蟲(chóng)的感染途徑(jìng)是動物攝入(rù)或接觸到含有假包囊的糞便或墊料等,假包囊進入(rù)到體內後(hòu),由消化液等作用轉化為滋養體,滋養(yǎng)體在盲腸中(zhōng)增殖(zhí);滋養體進入到結腸後,由於環(huán)境幹燥,再次轉化為假包囊,隨後排出體外。有資料顯示,在盲腸中滋養體和假包囊比例約為8:1,在結腸中滋養體和假包囊比例(lì)約(yuē)為1:1。因此,在動(dòng)物排(pái)出的糞便中,多數檢測(cè)到的都是假包囊。雖然鼠三毛滴蟲一直以來被認為是非致病(bìng)性鞭毛蟲,但也(yě)有資料(liào)顯示鼠三毛滴蟲可引起實驗動物的厭食和腹瀉。
40× 紅色(sè)箭(jiàn)頭為鼠(shǔ)三(sān)毛滴蟲,可見明顯波(bō)動膜
40× 紅色(sè)箭頭為毛滴蟲偽包(bāo)囊,藍色箭頭(tóu)為滋養體
02賈(jiǎ)第(dì)鞭毛蟲
賈第鞭毛(máo)蟲在生(shēng)物學分類上隸屬(shǔ)於(yú)雙滴目(mù)(Diplomonadida),六鞭科(Hexamitidae),賈第屬(Giardia),屬於致病性鞭毛蟲。賈第(dì)屬(shǔ)的形態很相似(sì),但(dàn)具有種屬特異性,因此根據宿主而分為不(bú)同的蟲(chóng)種(zhǒng)。感染齧齒類(lèi)動物的(de)蟲種有(yǒu)腸賈第鞭毛蟲(又稱十二指腸賈第鞭毛蟲或藍氏賈第鞭毛蟲)(Giardia intestinalis/duodenalis/lamblia)、倉鼠賈第鞭毛蟲(chóng)(G. cricetidarum)、鼠賈(jiǎ)第鞭毛蟲(G. muris)和微小賈第鞭(biān)毛蟲(G. microti)。腸賈第鞭毛蟲根據其基因型被分為8個型,其中G型會感染齧齒(chǐ)動物。
賈第鞭毛蟲具有滋養(yǎng)體和(hé)包(bāo)囊兩種時期,滋養體呈典型(xíng)的倒置梨形(xíng),呈“落葉”式運動(dòng);包囊(náng)呈卵圓形,長8~10um,寬7~10um。由於蟲體可在(zài)包囊內增殖,所以有時可在包囊內看(kàn)見兩(liǎng)個或四個核。滋養體(tǐ)是其生長、發(fā)育和增殖期;四核的包囊則為感染期。賈第鞭毛蟲通過攝入或接觸含包囊的糞便或飲用水等進行傳播,包囊進入消化道內,經胃酸刺激包囊會生成兩個滋養體;當滋養體到達空(kōng)腸時,又轉化成包囊。一般正常(cháng)動物感染賈第鞭毛蟲症狀不明顯(xiǎn),有時會出現體(tǐ)重減輕,毛發粗糙(cāo)等症狀;但可能(néng)會導致(zhì)免疫缺陷動物死亡。
40× 紅色箭頭為賈第鞭毛蟲包囊
03鼠六鞭毛蟲
鼠六鞭毛(máo)蟲(chóng)(Spironucleus muris,舊(jiù)稱Hexamita muris)在生物學分類上隸屬於雙滴目(Diplomonadida),六鞭科(Hexamitidae),六鞭(biān)屬(Hexamita)。鼠六鞭毛蟲具有滋養體和包(bāo)囊兩種時期,滋養體呈細長梨形且兩(liǎng)側對稱,約7~9umx2~3um,呈直線快速運動;包囊呈橢圓形,約4x3um,包囊最多可含四個核。鼠六鞭(biān)毛(máo)蟲的生活史與賈第鞭(biān)毛蟲相似,體型比賈第小很多。
鼠六鞭毛蟲感染(rǎn)成年鼠(shǔ)和免疫功能正(zhèng)常鼠後一般無(wú)明顯症狀;但對於3-6周小鼠(shǔ),易出現慢性腸炎、體重(chóng)減輕等症狀,更嚴重的會導致小鼠死亡。小鼠和(hé)倉鼠的鼠六鞭毛蟲可(kě)以相互傳播(bō),但大鼠的(de)鼠六鞭毛蟲具有種屬特異(yì)性。
40× 紅色箭頭為鼠六包囊
04唇鞭毛蟲
唇鞭毛蟲在生物學分類上隸屬於旋滴目(Retortamonadida),旋滴科(Retortamonadidae),唇鞭毛蟲屬(Chilomastix)。該屬目前已報道(dào)約(yuē)29種,形態相似。鼠唇鞭毛蟲(chóng)(Chilomastix bettencourti)寄生於齧齒動物盲腸中,具有滋養(yǎng)體(tǐ)和包囊兩個時期,包囊是感染期。滋養體呈梨形(xíng),約8.3~20.9umx6.6~8.4um;包囊呈檸檬型,約15x7um。腸唇鞭毛蟲(Chilomastix intestinalis)寄生於豚鼠,也具有滋養體(tǐ)和包囊兩個時期。
40× 紅色箭頭為鼠唇鞭毛蟲
40× 紅色箭頭為唇鞭(biān)毛蟲包囊
旋(xuán)滴科的(de)另一代表屬為旋(xuán)滴蟲屬(Retortamonas),這一屬形態和唇鞭毛蟲屬很相似,在豚鼠中發現過。如豚鼠內滴(dī)蟲(Retortamonas caviae),具有(yǒu)滋養(yǎng)體和包囊(náng)兩種時期(qī),滋養體呈梨形,約4~7umx2.4~4.3um;包囊呈檸檬狀,約4.2x3.5um。
05其(qí)他鞭毛蟲
還有一些不常見的鞭毛蟲(chóng),如小鼠中曾發現過的倉鼠四毛滴蟲 (Tetratrichomonas microti)以及豚鼠中(zhōng)曾發現的脫莫室(shì)滴蟲( Oikomonas termo)、奧古旋(xuán)滴蟲( Spiromonas augusta)和活(huó)動豚鼠毛滴蟲( Caviomonas mobilis)等。但目前僅有資料對這些鞭毛蟲的(de)形態進行描述,其致病性及防治方(fāng)麵研究甚少。
鞭毛蟲的檢測
在進行鞭毛蟲檢(jiǎn)測時,對於一些(xiē)滋養體狀態的鞭毛蟲,鏡檢法可容易檢出;但對於一(yī)些假包囊和包囊狀態的鞭毛蟲,就(jiù)需要檢測人員有一定(dìng)的經驗積累。根據上述部分鞭毛蟲的生活(huó)史,在鏡(jìng)檢(jiǎn)時應盡量選擇新鮮回盲腸內容物,可(kě)通過辨認滋養體,從而提高檢出率。
核酸檢測技術目(mù)前也(yě)常(cháng)用在鞭(biān)毛蟲的檢測中,如PCR、qPCR、巢式PCR、LAMP技術(shù)等。PCR方法可以通過擴增鞭毛蟲18S rRNA、16S rRNA、5.8s rRNA和(hé)ITS等保守基因,對鞭毛蟲(chóng)達到種水平鑒定。但由於實驗動物(wù)感染鞭(biān)毛蟲的多樣(yàng)性,對引物要求較高。因此,核(hé)酸檢測(cè)技術在鞭毛(máo)蟲的鑒定分類應用上還(hái)有很大的發展空間。
鞭(biān)毛蟲(chóng)對動物(wù)的(de)影響
雖然大部分鞭毛蟲均顯示對齧齒類實驗動物無(wú)致(zhì)病性(xìng),但這些鞭毛蟲對齧齒(chǐ)類實驗動物的行為改變和免疫狀態改變均應(yīng)當引起重視。目前也有越來越多的研究顯示,鞭毛蟲可以影響(xiǎng)齧齒類(lèi)實(shí)驗動物細胞因子(zǐ)的分泌;對(duì)實驗動物部(bù)分生理生化指標的影響;引起動物腸道炎症等。
鞭毛蟲的預防和控製
規範動物房飼(sì)養(yǎng)流程(chéng),對進出(chū)人員進行(háng)培訓管理,可以一定程度上預防鞭毛蟲傳播。動物房應當建立控製蟲害管理程序,野生的齧齒動(dòng)物攜帶很多寄生蟲,具有很大的潛在(zài)風險。首(shǒu)先一(yī)定要保證(zhèng)動物飲(yǐn)水和飼料的潔淨度;選擇合適飼料,保證動物營養,從(cóng)而增加免疫力;動物飼養流程規範,避免不當操作而(ér)引(yǐn)起鞭(biān)毛蟲傳播;引入動物來源穩定,避免引入疫(yì)區動物而汙染屏障設施;不同(tóng)等級動物分區飼養,避免交(jiāo)叉汙染;增加對設施內動物質量監測頻率,都可以對鞭毛蟲(chóng)的傳(chuán)播起到預防作用。
在發現陽性動(dòng)物後,應迅速隔離陽性動物並進行篩查,防止擴(kuò)散傳播。在飲用(yòng)水中(zhōng)加入硝基咪唑類藥物,如甲硝唑和替(tì)硝唑,可以對鞭毛(máo)蟲起到控製作(zuò)用(yòng),但並不能完全清(qīng)除;近年來有一些研(yán)究證明甲硝(xiāo)唑對大鼠和小(xiǎo)鼠有致(zhì)癌致突變性,替硝唑副作用較小。賈第鞭毛蟲還可以選擇(zé)芬苯達唑、甲苯達唑和阿(ā)苯達(dá)唑。但(dàn)若想對設施內鞭毛蟲進行完全清除,建議篩查並淘汰陽性動物。淘汰陽性動物後(hòu),應及時清理汙(wū)染的糞便及墊料(liào),並進行無害化處理;對汙染(rǎn)的籠具可進行高溫滅菌處理(lǐ)。
一(yī)般鞭毛蟲對消毒(dú)劑都比較敏感,可使用季銨鹽類消毒劑對房間進行定期消毒處理(lǐ),也可(kě)有效控製鞭毛蟲傳播。鞭毛蟲的包囊和(hé)偽包囊對幹燥環境比較敏感,在幹燥環境(jìng)中存活時(shí)間較短,同時該時期也是大部(bù)分鞭毛蟲的感染期。保持動物飼養環境幹燥,也可以對鞭毛蟲傳播起到控製(zhì)作用。
如需徹(chè)底清除鞭毛蟲,可以使(shǐ)用剖腹產技術和胚胎移植技術達到淨化目的。