非人靈長類（lèi）動物（NHP）精液樣本采（cǎi）集有多種目的，包括生殖研（yán）究、物種保護、傳染病研究以及在藥物開發（fā）過程中評估生殖安全（quán）性。在（zài）生物醫藥研究中最常見的精液采集方法是電刺激和陰莖振動刺激。電刺激是利用電流刺激NHP動物產生射精的過程。最常用的電刺激方法是直腸探針電刺激法（RPE）和陰莖電刺激（jī）法（PEP）。據報道，直腸探針電（diàn）刺激產生的樣（yàng）品精子（zǐ）濃度低於陰莖電刺激。因此，它通常被認為不太適合於精液樣本的定量評價，而用於定性（xìng）分析。陰莖電刺（cì）激最常用於（yú）收（shōu）集精（jīng）子進行定量分（fèn）析，例如，測定精子數量和/或濃度，因為該方法采集（jí）到的精（jīng）液量較大。而對於小型非人靈長類動物（如鬆（sōng）鼠猴和狨猴），陰莖振動刺激法（PVS）是比電刺激法更優的（de）采精方（fāng）法，因為它（tā）更適合這些動物的生理特點，同時對動物的福利影響較小。

直腸（cháng）探針電刺激法（RPE）

描述：這是（shì）較早使用（yòng）的（de）NHP采精（jīng）方法。通過直接刺激盆腔器官周圍的（de）神經肌肉，導致盆腔器官收縮和放鬆，從而排出內容物。該過程（chéng）需要（yào）對動（dòng）物進行輕度（dù）麻醉，但（dàn）不需要對動物進行訓練。操作者的技術和培訓對程序的成功至關重要。

操作步驟：動物被輕度麻醉後側臥（wò）或在保定架上俯臥，使用合（hé）適大小的探針，在插入探針前，電極需輕磨、衝洗和消毒。陰莖被輕輕拉出並清潔（可用無菌生理鹽水（shuǐ）），然後在探針上塗上一層薄薄的水溶性潤滑凝（níng）膠。探針電極需對準前列腺（xiàn），為了確保電極與前列腺接觸，可將探頭的另一端抬起，輕輕向下按壓探頭的尖端（duān）。通過逐漸增加（jiā）電（diàn）壓（yā）直到動物出現腿部伸展等反應，確（què）定動物的電（diàn）壓設定點。達（dá）到反應點後（hòu），電壓保持不變一段時間（最多約（yuē）5秒），然後（hòu）逐漸（jiàn）降低。這種電壓的逐步增加、保持和降低構成了（le）一個完整的刺激周期。通過多次刺激，通常三組刺激（jī）可以產生射精。在整個刺激過程（chéng）中，陰莖的尖端需要保持在預熱的玻璃燒杯或其他收集容器上方。

適用場景：由於這個方法（fǎ）產生的樣本精子濃度較低，因此更適合用於定性分析，如檢（jiǎn）測精（jīng）液中精子的存在以確認性成熟（shú），以及評估（gū）精子細胞的形態（tài）。

陰莖電刺激法（PEP）

描述：該方法通過（guò）刺激陰莖中的（de）傳入神經末梢，隨後將刺激（jī）傳（chuán）遞到與陰莖勃起和（hé）射精相關的傳出神經通路。該方法在動（dòng）物清醒狀態下采集，傳統的（de）保定方式是使用猴杆或者頸圈將動物固定在（zài）開放式的（de）猴椅上，但近期有研究表明使用封閉箱椅（closed box chair）是一種更優化（huà）的保定方（fāng）式，可以（yǐ）訓練動物直接從籠子進入封閉箱椅內，對動物福利、精（jīng）液質量都（dōu）有顯著改善。PEP已被證明能夠更好地刺激整個生殖道，並且由於無需麻醉，減少了尿液汙染和精液樣本稀釋的問題。此外，與直腸探針法相關的逆行射精（精（jīng）液進入膀胱）的風險在陰莖電刺（cì）激法中被（bèi）最小化。這種非侵入（rù）性技術確實需要對動物進行訓練（liàn），並且需要控製實驗環境（例如安靜的房（fáng）間、熟悉動物的（de）工作（zuò）人員）。與直腸（cháng）探針電（diàn）刺激技術相比（bǐ），這種方法可能需要更長的時間來獲取樣本，但通常不會超過幾分鍾。陰莖電（diàn）刺激法的（de）一（yī）個潛在缺點是，有些動物對陰莖（jīng）刺激沒有反應，因此無（wú）法提供精液樣本。

操（cāo）作步驟：將陰（yīn）莖輕輕拉出，用潤滑凝膠包裹的除（chú）顫器（qì）墊包（bāo）裹陰莖，將電極連（lián）接到電刺激器設備上。從低電壓開始刺激（根據動物的品種和體格）不（bú）超過15秒，逐漸增加到預設的最大（dà）值（zhí）。每（měi）次刺激時，觀察動物的生理反應（yīng）和射精，整個過程通常不超（chāo）過3次刺激。不同品種的電壓刺激相差（chà）較大，對（duì）於食蟹猴而言，可以從10-30伏特（tè）開始，如果需要，可以（yǐ）以 5-10 伏（fú）特的增量逐步（bù）增加，最高至約50 伏特。在刺激過程（chéng）中將收集管放在陰莖（jīng）尖端以收集（jí）射精的（de）精液樣本。

適用場景：該方法適用於需要較高精子數量和（hé）質量的場景（jǐng），如體外受精（IVF）或單精子卵胞漿內注射（ICSI），因為其（qí）能獲得更高的精液（yè）量和精子濃度。

陰莖振動刺激（jī）法（PVS）

描述：該方法利用自然反射，產（chǎn）生正常的射精反應，從而獲得自（zì）然射精。使用經過改裝（zhuāng）的振動（dòng）設備（bèi），並配（pèi）備收集（jí）容器。該方法通常將（jiāng）清醒的動物保定在猴椅上，並在黑暗的房間中進行，避免動物過於激動。

操（cāo）作步驟：將陰莖輕（qīng）輕從包皮鞘中拉（lā）出，將振動玻璃管放在陰莖尖端並（bìng）保持接觸。根據動物對刺激的反應逐漸調整振動參數，並在刺激期間提（tí）供休息時（shí）間。如果在15-20分鍾內未達到射精，則停止刺激。

適（shì）用場景：在小型非人靈長類動物（如鬆鼠猴和狨猴）中，PVS是首選方法，因為這些動物體型較小，直接放置電極進行陰莖刺激（jī）較為困難，且直腸探針法在（zài）這些小型NHP物種中也不太適用，較小的生殖道和消化道結構可能無法讓直腸探針精準放（fàng）置。

同時，對（duì）鬆鼠猴和狨猴的研究發現，與 RPE 采集的（de）樣本相（xiàng）比，振動刺激采集的（de）精（jīng）液樣本中精子和附屬腺的產生顯（xiǎn）著增加。PVS 可產生質量更高的射精，結合（hé）了不需要鎮靜或輕（qīng）度麻醉的優點（diǎn），幾乎不引起不適，並產生無（wú）汙染的自然射精。

無論采用何種精液采集方法，均應慎重考慮采精動物（wù）的選擇。確（què）認精子發生（通過檢測精液中的精子）是確認 NHP 性成熟的最可（kě）靠方法。在一些 NHP 種屬中，精液采集時間應考慮季節性。在此類確認之前，可通過應用常規選擇標準（如（rú）年齡、體重和/或睾丸體積）優化動物（wù）的選擇。睾酮由（yóu）於其脈衝式/晝夜節律性波動和動物間個體差（chà）異較（jiào）大，並不是可靠判（pàn）定性成熟的指標。

性成熟的具體標準還取決於動物的種屬甚至地理來源。例如，來自毛裏求（qiú）斯的食蟹猴已被證實從 3-4 歲開（kāi）始性成熟（精液（yè）中的精子），而來自（zì）亞洲大陸（lù）的食蟹猴需要額外一年（> 4 歲）才能達（dá）到（dào）性成（chéng）熟。關於食蟹猴和恒河猴的文獻表明，小於4歲和體重小於4kg的動物不太可能性成熟。

精液（yè）采集操作的福利考量

在精液采集時，也（yě）應（yīng）關注動物福利的（de）問題，比如直腸探針電刺激法（RPE）比（bǐ）其他采精技術更具侵入性，因為該方法（fǎ）需要將探針插入動物的直腸，直接刺激前列腺和盆腔器官，可能會對動物造成一定的不（bú）適或潛在的生理損（sǔn）傷。因此在進行直腸探針電刺激前，應（yīng）仔細檢查直腸（cháng）是否存在異常，如瘢痕、狹窄（zhǎi）或痔瘡。操作者需要密切監控動物的反應（yīng）和身（shēn）體狀（zhuàng）況，定期檢（jiǎn）查是否有（yǒu）出血或組織損傷（shāng）的跡象。一旦發現異（yì）常，應立即（jí）停止操作並給予動物（wù）恢複的時間。同時，提供必要的操作後護理和采精頻率的限製也是（shì）確（què）保動物福利的重（chóng）要措施。

而陰莖電刺激和（hé）陰莖（jīng）震動刺激法（fǎ）雖然無創，動物也是無需麻醉在猴椅或者封閉箱椅中操作（zuò），因此操作過程中應關注（zhù）的是對動物進行馴化和保定適應，減少動物的應激。同時在電刺激時應嚴格控製給予刺（cì）激的電（diàn）流，以及電刺激的次數。

通過上文描述，可以看出選擇合適的動物以及合適的方法才能夠采集到合適的樣本，同時應（yīng）關注動物的福（fú）利問題（tí），最大程度減少對動物的不利（lì）影響。